在細(xì)胞生物學(xué)、免疫研究等領(lǐng)域，高質(zhì)量的肺組織單細(xì)胞懸液是后續(xù)流式分析、單細(xì)胞測(cè)序的核心基礎(chǔ)。傳統(tǒng)手動(dòng)制備方法易因研磨不均、消化失控導(dǎo)致細(xì)胞活性低、雜質(zhì)殘留多，而借助單細(xì)胞懸液制備儀的標(biāo)準(zhǔn)化流程，可顯著提升懸液質(zhì)量與實(shí)驗(yàn)效率。本文將詳細(xì)介紹基于單細(xì)胞懸液制備儀的小鼠肺組織單細(xì)胞懸液制備全流程，為相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供可復(fù)用的操作范式。
實(shí)驗(yàn)材料：健康小鼠一只、解剖工具一套、單細(xì)胞懸液制備儀一臺(tái)、消化液1瓶、終止液1瓶、1XPBS 1瓶 、70um濾網(wǎng)1個(gè)、離心機(jī)1臺(tái);流式細(xì)胞儀用于活率檢測(cè)
單細(xì)胞懸液制備儀
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>通過單細(xì)胞懸液制備儀的標(biāo)準(zhǔn)化操作，實(shí)現(xiàn)小鼠肺組織的高效解離，獲得無明顯組織碎片、細(xì)胞粘連少的單細(xì)胞懸液，同時(shí)最大限度保留細(xì)胞活性(目標(biāo)活率≥95%)，為后續(xù)流式細(xì)胞分析、單細(xì)胞測(cè)序、細(xì)胞功能檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)提供合格樣本，解決傳統(tǒng)手動(dòng)制備方法中 “細(xì)胞活率低、純度差、重復(fù)性弱” 的痛點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、選取健康小鼠1只，斷頸處死，打開腹腔，取出肺器官
2、用1XPBS洗滌肺器官
3、選取28.5mg肺組織，用眼科剪剪成糊狀
4、放入加滿消化液的離心管中
5、放入單細(xì)胞懸液制備儀的管架上，管架預(yù)熱5分鐘
6、選擇模塊4進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后儀器自動(dòng)停止
7、用70um濾網(wǎng)過濾，加入終止液終止消化(消化液：終止液1：2)
8、放到離心機(jī)上重懸
9、重懸后棄掉上清，加入少量PBS打散混勻底部沉淀細(xì)胞
10、吸取200ul單細(xì)胞懸液，加入PI避光染色10分鐘
11、后續(xù)進(jìn)行流式分析，細(xì)胞活率為98.67%
實(shí)驗(yàn)效果：
取材
實(shí)驗(yàn)前
實(shí)驗(yàn)后
結(jié)果分析：活率98.67%
注意事項(xiàng)
1. 機(jī)器使用時(shí)應(yīng)保證位置放置平穩(wěn)
2. 機(jī)器適于短時(shí)、間歇工作，請(qǐng)勿長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)使用,工作時(shí)間建議不超過 8 小時(shí)。
3. 為保護(hù)機(jī)器內(nèi)部的電路和機(jī)械，禁止用流水沖洗，而只能用濕布擦拭。
4. 使用過程中如有任何異常，應(yīng)立即斷電，交由專業(yè)人員處理。
5. 機(jī)器必須放置在平整的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上(最好是石質(zhì)臺(tái)面)，以防設(shè)備工作時(shí)振動(dòng)。
6. 一定要時(shí)刻保持警惕狀態(tài)，請(qǐng)一切檢查好之后再開啟動(dòng)!
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，借助單細(xì)胞懸液制備儀的精準(zhǔn)控溫與標(biāo)準(zhǔn)化消化模塊，最終獲得的小鼠肺組織單細(xì)胞懸液活率高達(dá) 98.67%，遠(yuǎn)超手動(dòng)制備(通常活率 80%-90%)，且懸液中無明顯組織碎片，完全滿足流式分析對(duì)樣本純度與活性的嚴(yán)苛要求。這一結(jié)果印證了單細(xì)胞懸液制備儀在動(dòng)物組織單細(xì)胞處理中的核心價(jià)值 —— 它不僅通過管架預(yù)熱、專屬模塊設(shè)置簡(jiǎn)化了操作流程，還避免了人為操作差異導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差，讓肺組織單細(xì)胞懸液制備從 “依賴經(jīng)驗(yàn)” 轉(zhuǎn)向 “標(biāo)準(zhǔn)化可控”。
無論是基礎(chǔ)科研中的細(xì)胞表型分析，還是臨床前研究中的肺臟疾病機(jī)制探索，單細(xì)胞懸液制備儀都能為高質(zhì)量樣本制備提供穩(wěn)定支持，成為提升實(shí)驗(yàn)效率與數(shù)據(jù)可靠性的關(guān)鍵工具。
